Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展比较慢的过程中逐渐扩展

从第一次不止现口内自身血清到不止现1标准型肝炎药理学征状的方面率在婴幼儿时期就有比较好的叙述，多个口内自身血清乙型肝炎的婴幼儿中都有70%在血清转换后10月内患上肝炎，而随访15年的婴幼儿这一人口比例上升到84%。相对来说之下，占药理学1标准型肝炎一半以上的标准型1标准型肝炎的患病机制还不会获得必要的研究成果。

日渐多的人开始用于分期系统来度量1标准型肝炎的方面：变异在不止现多种口内自身血清时踏入第1之前，不止现摄入量异常时踏入第2之前，不止现征状时踏入第3之前。一些多发口内自身血清乙型肝炎的变异，在1期和2期，方面较慢，并的发展为患病的1标准型肝炎。我们之后叙述了三分组在首次检测到多种口内自身血清抽样后数10年无肝炎的以致于慢方面者，这分组病患者000人少，但特征非常恰当。随后，我们发现口内自身抗原特异性CD8+T细胞膜底物在方面加速的病患者中都整躯不存在，但在全面性患病和长年存在的肝炎病患者中都很容易检测到。这不太可能表明，与方面病患者相对来说，这些病患者血栓底物的恒定增强。

中期研究成果表明，尽管恒定性T细胞膜(Treg)数量短时长，但肝炎病患者存在一些整躯功能缺陷，其中都包括对IL-2的底物技能降低。此外，肝炎病患者中都的振荡CD4+T细胞膜不太可能对恒定来得具抵抗性，乏善可陈为振荡T细胞膜的选择性减慢，其本质产生的Treg和活躯产生的可借Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞膜中都IL-2底物减慢。本研究成果的目的是叙述了CD4+恒定性T细胞膜(Treg)在大群以致于加速方面者中都的特征，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

新方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁以下肺癌的病患者亲戚中都检查1标准型肝炎的生命危险心理因素。我们之后叙述了长年加速方面者的特征，他们保持良好多重口内自身血清乙型肝炎超过10年，但不会不止现肝炎的药理学征状，慢性或非完成性血栓。随后，10名继续保持良好无肝炎并愿意透过大量血清抽样的加速方面者设为T和B细胞膜整躯功能深入研究成果。在目前的研究成果中都，8名慢方面者(SP分组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身血清乙型肝炎。所有的行动者都属于1标准型肝炎方面的1期，尽管一些人随后丧失了口内自身血清对某些抗原的乙型肝炎底物，然而，一名病患者之前属于2期数6年，但不会不止现药理学征状，一名病患者被诊断为肝炎，该受试者72岁，在采集科学研究抽样时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究成果中都对该小分子完成了单独指标。转化外周血单个核反应细胞膜(PBMCs)，选用多参数流式细胞膜法术和T细胞膜选择性试验车指标小分子中都Treg的增益、表标准型和整躯功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和重返)完成无监督聚类深入研究成果，指标Treg表标准型。

结果：与肥胖症小分子相对来说，来自慢方面躯的心灵CD4+T细胞膜的监督聚类推断，抑制的心灵CD4+ Treg增益上升，与糖皮质激素可借的TNFR就其受躯(GITR)强调上升有关。一名HbA1c升温的病患者与方面加速者和匹配的解读分组相对来说，Treg谱有所区别。整躯功能深入研究成果表明，与肥胖症小分子相对来说，来自加速方面躯的Treg依赖性的CD4+振荡T细胞膜选择性明显受损。乏善可陈为对振荡CD4+T细胞膜CD25和CD134强调的选择性上升。

平面图1 透彻的表标准型深入研究成果推断，CD4+Treg亚标准型在慢方面表头中都上升。由FlowSOM生成的Treg室，群聚在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标示出物强调确认不止10个元簇:心灵T细胞膜_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞膜;HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用于9个不同Treg标示出生成的10个元簇的MST。每个数据流代表人一个战略性(100个战略性)，相当大的元战略性(10个元战略性)在数据流分组周围上色。每个数据流中都的年糕平面图透露单个标示出的强调层次。(b)每个元聚类的热平面图，以推断整躯标示出强调。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成平面图，以及FlowSOM定位的每个元簇的裂口。(e-l)相对重元素为每个metacluster装入中央线平面图(重元素> 0.05%)考虑到为HD和SP分组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞膜(l)。粉红色左上角代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配标记秩检测。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用于CITRUS的预测模标准型证明，Treg增益的上升是方面加速的标志。基准旁路(a - f)和柑橘深入研究成果(g-k)相当SP行动者和匹配的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的不同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的代表人性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调完成转化，演示FlowSOM群躯。(b) HD(白斑)和SP(黑纹)分组以及小分子SP 606(粉红色)中都CD25+ cd127的增益核反应心内容平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路子集的装入中央线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，上标突不止的簇被定位为SP和HD表头之间的不同。(j)装入中央线平面图推断了在SP(黑纹)和HD(灰点)分组中都，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对重元素(人口比例)。(k)直方平面图推断每个簇的表标准型(红色)和Treg标示出相对强调与故事情节强调(红色);上列，CPUTreg_3;示例一行，CPUTreg_4。故事情节与所有其他簇中都标示出的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配标记秩检测

平面图3 与肥胖症献血者相对来说，方面加速者心灵treg的GITR上升。每个心灵CD4+T细胞膜元簇(心灵T细胞膜_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞膜;HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个强调标示出的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的强调热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中都所有HD(黄褐色)、所有SP(红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR强调并联，推断直方平面图(c)和核反应心内容平面图(d)。Wilcoxon匹配标记秩和检测，p< 0.07(粉红色)所有小分子包括，p< 0.05(红色)小分子SP 606和匹配的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR强调，从基准旁路，从所有HD(黄褐色)、所有SP(红色)和SP 606(粉红色)并联，推断直方平面图(e)和核反应心内容平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配标记秩检测

平面图4 来自加速方面的CD4+ treg细胞膜控制振荡CD4+T细胞膜的技能降低。SP分组用红色的中央线和左上角透露，HD分组用黑色的中央线和左上角透露，粉红色的中央线/左上角透露小分子sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜完成分选。CD4+CD25−(转发者)被标示出为CFSE, Treg按观察的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠还原细胞膜，培训3天内完成流式细胞膜法术检测。(a-d)与CD4+转发者相对应的treg培训(骨髓)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培训。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE选择性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性百分比。用于乙型肝炎解读(抑制的鼓动细胞膜下同treg)推算选择性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究成果。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

平面图5 振荡CD4+T细胞膜对加速方面的T细胞膜还原的选择性来得敏感。SP分组用红色的中央线和左上角透露，HD分组用黑色的中央线和左上角透露，粉红色的中央线/左上角透露小分子sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜完成分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标示出，treg按观察的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠还原细胞膜，培训3天内完成流式细胞膜法术(CD25反染)和细胞膜因子深入研究成果。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培训。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE选择性次之(b)。(c,d) CD25选择性次之(c)和CD134选择性次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中都的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究成果。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

结论：我们得不止的结论是，来自加速方面子的还原心灵CD4+Treg在GITR强调中都获得了扩张和丰富，突显了更进一步研究成果Treg在1标准型肝炎不太可能会变异中都的异质性的重要性。

原文不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28