Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中日渐扩展

从第一次再次出现家兔自身血液到再次出现1DF癌症医学副作用的实质性不下在孩童时期就有很好的揭示，多个家兔自身血液乙DF肝炎的孩童以前有70%在血液转换后10年底肺结核癌症，而随访15年的孩童这一%减少到84%。比起，占医学1DF癌症一半以上的DF1DF癌症的病症基本功能还不会取得充分的学术研究。

更加多的人开始适用已确定系统来定义1DF癌症的实质性：生物体在再次出现多种家兔自身血液时转入第1前期，再次出现摄入量再次出现异常时转入第2前期，再次出现副作用时转入第3前期。一些多发家兔自身血液乙DF肝炎的生物体，在1期和2期，实质性较很慢，并发展为病症的1DF癌症。我们以前揭示了一三组在首次监测到多种家兔自身血液样本后极其少10年无癌症的太快实质性者，这三组病变人数少，但特性极其明确。随后，我们辨认出家兔自身血液特异性CD8+T巨噬细胞催化在实质性很很慢的病变以前理论上不存有，但在更进一步病症和长期存有的癌症病变以前很非常容易监测到。这不太可能表明，与实质性病变相比，这些病变自身免疫催化的调节增强。

早期学术研究表明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量也就是说，但癌症病变存有一些基本功能缺陷，其以前包括对IL-2的催化能力下降。此外，癌症病变以前的物理现象CD4+T巨噬细胞不太可能对调节更具抵抗性，观感为物理现象T巨噬细胞的减缓增强，自然产生的Treg和体外产生的诱导Treg，以及血液漫长的CD4+T巨噬细胞以前IL-2催化增强。本学术研究的目的是揭示了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群极很很慢实质性者以前的特性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

数据分析方法：BOX学术研究是一项以人群为基础的纵向学术研究，在21岁以下确诊的病变亲属以前检查1DF癌症的小心因素。我们以前揭示了长期很很慢实质性者的特性，他们依然多重家兔自身血液乙DF肝炎多达10年，但不会再次出现癌症的医学副作用，很慢性或非性虐待自身免疫。随后，10名继续依然无癌症并乐意提供大量血液样本的很很慢实质性者设为T和B巨噬细胞基本功能数据分析。在迄今为止的学术研究以前，8名很慢实质性者(SP三组)，以前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身血液乙DF肝炎。所有的参与者都处于1DF癌症实质性的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身血液对某些血液的乙DF肝炎催化，然而，一名病变已经处于2期极其少6年，但不会再次出现医学副作用，一名病变被诊断为癌症，该受试者72岁，在热带植物实验样本时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析以前对该ADP进行时了之外评估。转化外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞拳法和T巨噬细胞减缓试验评估ADP以前Treg的频不下、性状和基本功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、举例来说和回归)进行时无监督聚类数据分析，评估Treg性状。

结果：与健康ADP相比，来自很慢实质性体的心灵CD4+T巨噬细胞的监督聚类辨识，激活的心灵CD4+ Treg频不下减少，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)传达减少有关。一名HbA1c上升时的病变与实质性很很慢者和转换的对照三组相比，Treg谱有所相同。基本功能数据分析表明，与健康ADP相比，来自很很慢实质性体的Treg介导的CD4+物理现象T巨噬细胞减缓引人注意毁损。观感为对物理现象CD4+T巨噬细胞CD25和CD134传达的减缓减少。

平面图1 深入的性状数据分析辨识，CD4+Treg亚DF在很慢实质性配置文件以前减少。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上面物传达鉴定出10个元簇:心灵T巨噬细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)适用9个相同Treg上面降解的10个元簇的MST。每个键值值得一提的是一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在键值三组周围上色。每个键值以前的饼平面图回应单个上面的传达级别。(b)每个元聚类的热平面图，以辨识结构上上面传达。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)降解平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的孔洞。(e-l)相对轻元素为每个metacluster罐两条路线平面图(轻元素> 0.05%)未确定为HD和SP三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T巨噬细胞(l)。红色边框值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对回应法秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 适用CITRUS的预测模DF证明，Treg频不下的减少是实质性很很慢的标志。分级制度门控(a - f)和柑橘数据分析(g-k)比较SP参与者和转换的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的值得一提的是性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达进行时转化，模拟FlowSOM群体。(b) HD(白点)和SP(黑斑)三组以及ADPSP 606(红色)以前CD25+ cd127的频不下汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的罐两条路线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达其中心着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD配置文件之间的相同。(j)罐两条路线平面图辨识了在SP(黑斑)和HD(灰点)三组以前，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对轻元素(%)。(k)直方平面图辨识每个簇的性状(粉红色)和Treg上面相对传达与背景传达(红色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。背景与所有其他簇以前上面的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对回应法秩检验

平面图3 与健康献血者相比，实质性很很慢者心灵treg的GITR减少。每个心灵CD4+T巨噬细胞元簇(心灵T巨噬细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个传达上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的传达热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇以前所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR传达组合成，辨识直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon配对回应法秩和检验，p< 0.07(红色)所有ADP包括，p< 0.05(红色)ADPSP 606和转换的HD不包括在测试以前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs以前GITR传达，从分级制度门控，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)组合成，辨识直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对回应法秩检验

平面图4 来自很很慢实质性的CD4+ treg巨噬细胞控制物理现象CD4+T巨噬细胞的能力下降。SP三组用红色的两条路线和边框回应，HD三组用灰色的两条路线和边框回应，红色的两条路线/边框回应ADPsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(；也者)被上面为CFSE, Treg按观察的%起始。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，养成3几天后进行时流式巨噬细胞拳法监测。(a-d)与CD4+；也者相对应的treg养成(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者养成。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE减缓百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百分比。适用乙DF肝炎对照(激活的声势浩大巨噬细胞不含treg)计算减缓百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 物理现象CD4+T巨噬细胞对很很慢实质性的T巨噬细胞重置的减缓更敏感。SP三组用红色的两条路线和边框回应，HD三组用灰色的两条路线和边框回应，红色的两条路线/边框回应ADPsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上面，treg按观察的%起始。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，养成3几天后进行时流式巨噬细胞拳法(CD25反染)和巨噬细胞因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同完成养成。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE减缓次之(b)。(c,d) CD25减缓次之(c)和CD134减缓次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成以前的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们推论的结论是，来自很很慢实质性子的重置心灵CD4+Treg在GITR传达以前取得了扩展和丰富，阐释了进一步学术研究Treg在1DF癌症风险生物体以前的关联性的重要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28