Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者的发展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出有家兔自身病原基底到显现出有1同型肝炎临床病患者的方面部将在成年人时期就有较好的揭示，多个家兔自身病原基底感染性的成年人中的有70%在血清转换后10月内身患肝炎，而随访15年的成年人这一比部将增高到84%。值得注意之下，占多数临床1同型肝炎一半以上的同型1同型肝炎的得病前提还没有获取充分的分析。

越来越多的人开始应用于分段系统来概念1同型肝炎的方面：个基底在显现出有多种家兔自身病原基底时进到第1前期，显现出有胰岛素异常时进到第2前期，显现出有病患者时进到第3前期。一些多发家兔自身病原基底感染性的个基底，在1期和2期，方面较快，并拓展为得病的1同型肝炎。我们早先揭示了一一组在首次测定到多种家兔自身病原基底比对后有数10年无肝炎的极快方面者，这一组病患者人数少，但特点非常明确。随后，我们发现家兔自身上皮细胞选择性CD8+T细胞内加成在方面较快的病患者中的整基底不不存在，但在近期得病和长期不存在的肝炎病患者中的很难以测定到。这可能确实，与方面病患者值得注意，这些病患者血栓加成的调节增强。

早期分析确实，尽管调节性T细胞内(Treg)数量正常，但肝炎病患者不存在一些机能缺陷，其中的还包括对IL-2的加成能力下降。此外，肝炎病患者中的的振荡CD4+T细胞内可能对调节不具抵抗性，观感为振荡T细胞内的依赖性消散，纯净产生的Treg和基底外产生的可借Treg，以及上皮细胞漫长的CD4+T细胞内中的IL-2加成消散。本分析的目的是揭示了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一小群极较快方面者中的的特点，他们的平均年龄一组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以人群为基础的纵向分析，在21岁以下确诊的病患者亲属中的检查1同型肝炎的危险原因。我们早先揭示了长期较快方面者的特点，他们保证多重家兔自身病原基底感染性高达10年，但没有显现出有肝炎的临床病患者，快性或非同步进行性血栓。随后，10名继续保证无肝炎并乐意提供大量血液比对的较快方面者归入T和B细胞内机能归纳。在迄今为止的分析中的，8名快方面者(SP一组)，中的位年龄一组43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身病原基底感染性。所有的组织者都位处1同型肝炎方面的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身病原基底对某些上皮细胞的感染性加成，然而，一名病患者不太可能位处2期有数6年，但没有显现出有临床病患者，一名病患者被病因为肝炎，该病患者72岁，在采集科学研究比对时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中的对该可借同步进行了单独审核。复合外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内绝技和T细胞内依赖性试验审核可借中的Treg的频部将、表同型和机能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和重返)同步进行无监督聚类归纳，审核Treg表同型。

结果：与保健可借值得注意，来自快方面基底的心灵CD4+T细胞内的监督聚类结果显示，激活的心灵CD4+ Treg频部将增高，与依赖性作用可借的TNFR相关蛋白(GITR)传达增高有关。一名HbA1c下降的病患者与方面较快者和反之亦然的对照一组值得注意，Treg谱有所不同。机能归纳确实，与保健可借值得注意，来自较快方面基底的Treg介导的CD4+振荡T细胞内依赖性明显受损。观感为对振荡CD4+T细胞内CD25和CD134传达的依赖性增高。

三幅1 深入的表同型归纳结果显示，CD4+TregHIV-在快方面函数调用中的增高。由FlowSOM转化的Treg四楼，群聚在来自所有可借的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标有物传达鉴别出有10个元簇:心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)应用于9个不同Treg标有转化的10个元簇的MST。每个键值代表人一个战略性(100个战略性)，巨大的元战略性(10个元战略性)在键值一组周围上色。每个键值中的的饼三幅对此单个标有的传达级别。(b)每个元聚类的热三幅，以结果显示整基底标有传达。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)转化三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比丰度为每个metacluster筒相三幅(丰度> 0.05%)确定为HD和SP一组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞内(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞内(l)。红色橘色代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检测。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 应用于CITRUS的预测模同型证实，Treg频部将的增高是方面较快的标志。分级暂时性(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP组织者和反之亦然的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的传奇色彩三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR传达同步进行复合，仿真FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)一组以及可借SP 606(红色)中的CD25+ cd127的频部将核心内容三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性集合的筒相三幅;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度后处理，箭头突出有的簇被识别为SP和HD函数调用之间的不同。(j)筒相三幅结果显示了在SP(黑纹)和HD(灰点)一组中的，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相比丰度(比部将)。(k)三幅表结果显示每个簇的表同型(紫色)和Treg标有相比传达与背景传达(金色);上列，CPUTreg_3;上面动身，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中的标有的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检测

三幅3 与保健献血者值得注意，方面较快者心灵treg的GITR增高。每个心灵CD4+T细胞内元簇(心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个传达标有的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的传达热三幅(sp606不还包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR传达串联，结果显示三幅表(c)和核心内容三幅(d)。Wilcoxon配对记号秩和检测，p< 0.07(红色)所有可借还包括，p< 0.05(金色)可借SP 606和反之亦然的HD不还包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR传达，从分级暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(红色)串联，结果显示三幅表(e)和核心内容三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩检测

三幅4 来自较快方面的CD4+ treg细胞内控制振荡CD4+T细胞内的能力下降。SP一组用金色的直通和橘色对此，HD一组用红色的直通和橘色对此，红色的直通/橘色对此可借sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标有为CFSE, Treg按推论的比部将试样。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞内，培植3天后同步进行流式细胞内绝技测定。(a-d)与CD4+此番者相比应的treg培植(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培植。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE依赖性%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性%-。应用于感染性对照(激活的响应细胞内不含treg)计算依赖性%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 振荡CD4+T细胞内对较快方面的T细胞内酪氨酸的依赖性更敏感性。SP一组用金色的直通和橘色对此，HD一组用红色的直通和橘色对此，红色的直通/橘色对此可借sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标有，treg按推论的比部将试样。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞内，培植3天后同步进行流式细胞内绝技(CD25反染)和细胞内因兄归纳。HD Treg与HD、SP或sp606此番者主导培植。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE依赖性百分部将(b)。(c,d) CD25依赖性百分部将(c)和CD134依赖性百分部将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在名教授中的的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出有的结论是，来自较快方面兄的酪氨酸心灵CD4+Treg在GITR传达中的获取了扩展和丰富，突显了进一步分析Treg在1同型肝炎危险性个基底中的的系统性的必要性。

出有处出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28